Contenido
- ¿Qué es un genotipo y un fenotipo?
- Explicando el genotipado del VIH
- Explicando el fenotipo del VIH
- ¿Cuándo se realiza una prueba de resistencia genética?
Cuando ocurre un fracaso del tratamiento, se deben seleccionar combinaciones alternativas de medicamentos para suprimir esta nueva población de virus resistentes. Prueba de resistencia genética ayuda a facilitar esto al identificar los tipos de mutaciones resistentes en la "reserva viral" de una persona, al mismo tiempo que determina cuán susceptibles son esos virus a posibles agentes antirretrovirales.
Se utilizan dos herramientas principales para las pruebas de resistencia genética en el VIH: Ensayo genotípico del VIH y el Ensayo fenotípico del VIH.
¿Qué es un genotipo y un fenotipo?
Por definición, un genotipo es simplemente la composición genética de un organismo, mientras que un fenotipo son las características o rasgos observables de ese organismo.
Los ensayos genotípicos (o genotipado) funcionan identificando las instrucciones heredadas dentro de la codificación genética de una célula, o ADN. Los ensayos fenotípicos (o fenotipado) confirman la expresión de esas instrucciones bajo la influencia de diferentes condiciones ambientales.
Si bien la asociación entre genotipo y fenotipo no es absoluta, la genotipificación a menudo puede predecir el fenotipo, particularmente cuando los cambios en el código genético confieren cambios esperados en rasgos o características, como en el caso de desarrollar resistencia a los medicamentos.
La fenotipificación, por otro lado, confirma el "aquí y ahora". Su objetivo es evaluar la reacción de un organismo a cambios específicos en la presión ambiental, como cuando el VIH está expuesto a diferentes medicamentos y / o concentraciones de medicamentos.
Explicando el genotipado del VIH
La genotipificación del VIH es generalmente la tecnología más utilizada para las pruebas de resistencia. El objetivo del ensayo es detectar mutaciones genéticas específicas en el gag-pol región del virus ' genoma (o código genético). Esta es la región donde la transcriptasa inversa, la proteasa y las enzimas integrasa, las dianas de la mayoría de los fármacos antirretrovirales, se codifican en la cadena de ADN.
Al amplificar primero el genoma del VIH mediante la tecnología de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), los técnicos de laboratorio pueden secuenciar (o "mapear") la genética del virus utilizando diversas tecnologías de detección de mutaciones.
Estas mutaciones (o acumulación de mutaciones) son interpretadas por técnicos que analizan la relación entre las mutaciones identificadas y la susceptibilidad esperada del virus a diferentes fármacos antirretrovirales. Las bases de datos en línea pueden ayudar comparando la secuencia de prueba con la de un prototipo de virus "de tipo salvaje" (es decir, el VIH que no contiene mutaciones resistentes).
La interpretación de estas pruebas se utiliza para determinar la susceptibilidad a los medicamentos, y el mayor número de mutaciones clave confieren niveles más altos de resistencia a los medicamentos.
Explicando el fenotipo del VIH
El fenotipado del VIH evalúa el crecimiento del VIH de una persona en presencia de un fármaco y luego lo compara con el crecimiento de un virus de control de tipo salvaje en el mismo fármaco.
Al igual que con los ensayos genotípicos, las pruebas fenotípicas amplifican la región gag-pol del genoma del VIH. Esta sección del código genético se "injerta" en un clon de tipo salvaje utilizando tecnologia de ADN recombinante. El virus recombinante resultante se usa para infectar células de mamíferos in vitro (en el laboratorio).
A continuación, la muestra viral se expone a concentraciones crecientes de diferentes fármacos antirretrovirales hasta lograr una supresión viral del 50% y el 90%. A continuación, las concentraciones se comparan con los resultados de la muestra de control de tipo salvaje.
Los cambios de "pliegues" relativos proporcionan el intervalo de valores mediante el cual se determina la susceptibilidad al fármaco. Un cambio de cuatro veces simplemente significa que se necesitaba cuatro veces la cantidad de fármaco para lograr la supresión viral en comparación con la del tipo salvaje. Cuanto mayor sea el valor de veces, menos susceptible es el virus a un medicamento específico.
Estos valores se colocan luego dentro de los rangos clínicos inferiores y superiores, y los valores superiores confieren niveles más altos de resistencia al fármaco.
¿Cuándo se realiza una prueba de resistencia genética?
En los Estados Unidos, las pruebas de resistencia genética se realizan tradicionalmente en pacientes sin tratamiento previo para determinar si tienen alguna resistencia a los medicamentos "adquirida". Los estudios en los EE. UU. Sugieren que entre el 6% y el 16% de los virus transmitidos serán resistentes a al menos un fármaco antirretroviral, mientras que casi el 5% serán resistentes a más de una clase de fármacos.
Las pruebas de resistencia genética también se utilizan cuando se sospecha de resistencia a fármacos en individuos en terapia. La prueba se realiza mientras el paciente toma el régimen que falla o dentro de las cuatro semanas posteriores a la interrupción del tratamiento si la carga viral es superior a 500 copias / ml. Las pruebas genotípicas se prefieren generalmente en estos casos, ya que cuestan menos, tienen un tiempo de respuesta más rápido y ofrecen una mayor sensibilidad para detectar mezclas de virus de tipo salvaje y resistentes.
Generalmente, se prefiere una combinación de pruebas fenotípicas y genotípicas para personas con resistencia compleja a múltiples fármacos, particularmente para aquellas expuestas a inhibidores de proteasa.